MGA PARAAN NG PAGLINANG NG MICROORGANISMS. PAG-AARAL NG KULTURA AT BIOCHEMICAL
ARI-ARIAN
Ang paglilinang, iyon ay, ang paglilinang ng mga mikroorganismo sa laboratoryo, ay ginagamit upang pag-aralan ang kanilang mga pag-aari at upang makakuha ng biomass. Ang bakterya, fungi, actinomycetes, spirochetes at ilang protozoa ay nalilinang sa nutrient media. Ang Chlamydia, rickettsia, mga virus at ilang mga protozoa ay maaaring magparami lamang sa katawan ng isang hayop o sa mga nabubuhay na selula.
Ang mga katangian ng kultura ng ganitong uri ng mga mikroorganismo ay: 1) ang mga kondisyong kinakailangan para sa pagpaparami, at 2) ang likas na katangian ng paglago sa nutrient media. Ang mga pag-aari sa kultura ay isa sa mga katangian na isinasaalang-alang kapag nakikilala (tinutukoy ang uri) ng mga mikroorganismo.
Culture Media
Dapat matugunan ng media ng kultura ang ilang mga kinakailangan. Dapat silang maglaman ng lahat ng mga kinakailangang nutrisyon para sa pagpaparami ng ganitong uri ng microbes. Ang ilang mga pathogenic microorganism ay lumalaki sa simpleng nutrient media, habang ang iba ay nangangailangan ng pagdaragdag ng dugo, serum ng dugo, at mga bitamina para sa kanilang pagpaparami.
Sa kultura media, ang ilang mga kundisyon ay dapat nilikha sa pamamagitan ng pagdaragdag ng mga solusyon ng sodium chloride o buffer. Para sa karamihan ng mga bakterya, ang isang medium na nakapagpapalusog na naglalaman ng 0.5% sodium chloride ay kanais-nais. Ang reaksyon ng medium na nakapagpapalusog, kanais-nais para sa karamihan ng mga pathogenic bacteria, ay bahagyang alkalina, na tumutugma sa pH = 7.2-7.4. Ang Vibrio cholerae ay lumalaki sa pH = 7.8-8.5, mga kabute - sa pH = 5-5.5. Ang media ng kultura ay dapat na basa-basa, ibig sabihin, maglaman ng sapat na dami ng tubig, maging transparent at sterile hangga't maaari, iyon ay, bago maghasik, ay hindi naglalaman ng mga microbes.
Sa mga tuntunin ng komposisyon at pinagmulan, ang nutrient media ay natural, artipisyal at gawa ng tao. Ang natural na kultura ng media ay likas na mga produkto tulad ng patatas at iba pang mga gulay. Ang artipisyal na nutrient na media ng media ay inihanda alinsunod sa isang tukoy na resipe mula sa mga produkto na may pagdaragdag ng mga organic at inorganic compound. Naglalaman ang synthetic media ng ilang mga kemikal na compound sa mga kilalang konsentrasyon.
Sa pamamagitan ng pagkakapare-pareho, ang nutrient media ay likido, semi-likido, siksik. Ang agar-agar-polysaccharide na nakahiwalay sa damong-dagat ay karaniwang ginagamit bilang isang sealant. Ang Agar-agar ay hindi ginagamit ng mga mikroorganismo bilang isang nakapagpapalusog; bumubuo ito ng isang gel sa tubig na natutunaw sa 100 ° C at nagpapatatag sa 45 ° C.
Upang makakuha ng isang siksik na daluyan ng nutrient, ang agar-agar ay idinagdag sa isang konsentrasyon na 1.5-2%, para sa semi-likido - 0.5%.
Ayon sa kanilang inilaan na hangarin, ang kultura media ay maaaring nahahati sa ordinaryong (simple), espesyal, elektibo, pagkakaiba sa diagnostic.
Ang maginoo (simple) na nutrient media ay ginagamit para sa paglilinang ng karamihan sa mga mikroorganismo, ito ay mesopatamia sabaw (MPB), mesopatamia agar (MPA).
Ginagamit ang espesyal na nutrient media para sa paglilinang ng mga mikroorganismo na hindi lumalaki sa simpleng media. Halimbawa, agar ng dugo at sabaw ng asukal para sa streptococcus, serum agar para sa meningococcus at gonococcus.
Ginagamit ang elective culture media upang ihiwalay ang isang species mula sa pinaghalong iba't ibang mga bakterya. Ang ganitong uri ng bakterya ay lumalaki sa kapaligiran na ito nang mas mabilis at mas mahusay kaysa sa iba, na lumalabas sa paglaki nito; ang paglago ng iba pang mga bakterya ay naantala sa daluyan na ito. Halimbawa, coagulated serum para sa diphtheria bacillus, alkaline peptone na tubig para sa cholera vibrio, sabaw ng apdo para sa typhoid bacillus, saline media para sa staphylococcus.
Ang magkakaibang diagnostic culture media ay ginagamit upang makilala ang ilang mga uri ng bakterya mula sa iba sa pamamagitan ng kanilang aktibidad na enzymatic (tingnan ang kaukulang seksyon).
Paglinang at paghihiwalay ng mga purong kultura ng aerobic bacteria
Para sa paglilinang ng mga mikroorganismo, kinakailangan ang ilang mga kundisyon: mga kondisyon ng temperatura, aerobic o anaerobic.
Ang temperatura ay dapat na pinakamainam para sa species. Karamihan sa mga pathogenic bacteria ay umunlad sa 37 ° C. Gayunpaman, para sa ilang mga species, ang isang mas mababang temperatura ay pinakamainam, na nauugnay sa mga kakaibang katangian ng kanilang ekolohiya. Kaya, para sa salot na bacillus, ang natural na tirahan na kung saan ay mga rodent sa panahon ng pagtulog sa panahon ng taglamig, ang pinakamainam na temperatura ay 28 ° C, pati na rin para sa leptospira, para sa botulism bacillus - 28 ° C-35 ° C.
Bilang karagdagan sa pinakamainam na temperatura, para sa paglilinang ng mga mikroorganismo, depende sa mga species, kinakailangan ang aerobic o anaerobic na kapaligiran.
Upang mapag-aralan ang morpolohiya, pangkulturang, biokimikal at iba pang mga katangian ng microbes, kinakailangan upang makakuha ng isang purong kultura. Kadalasan ang isang kultura ng mga microbes ay tinatawag na kanilang akumulasyon sa isang medium na nakapagpalusog sa anyo ng labo, paglaki ng malapitan (pader), o isang pelikula sa ibabaw ng isang likidong daluyan o mga kolonya sa isang makakapal na daluyan. Ang isang solong kolonya ay nabuo mula sa isang microbial cell. Ang isang purong kultura ay isang kultura ng mga microbes ng parehong species na nakuha mula sa isang solong kolonya. Sa mga laboratoryo, ang ilang mga kilalang mga strain ng microbes ay ginagamit para sa iba't ibang mga pag-aaral. Ang isang pilay ay isang purong kultura ng mga microbes na nakuha mula sa isang tukoy na mapagkukunan, sa isang tiyak na oras, na may mga kilalang katangian. Bilang isang patakaran, ang mga microbial strain ay itinalaga ng isang tukoy na numero. Halimbawa, ang Staphylococcus aureus 209P strain ay ginagamit upang matukoy ang aktibidad ng penicillin.
Ang paghihiwalay ng mga purong kultura ng aerobes ay karaniwang tumatagal ng tatlong araw at isinasagawa ayon sa sumusunod na pamamaraan:
Ika-1 araw - microscopy ng isang pahid mula sa materyal na pagsubok, nabahiran (karaniwang sa pamamagitan ng Gram) - para sa isang paunang kakilala sa microflora, na maaaring maging kapaki-pakinabang sa pagpili ng isang medium ng kultura para sa inokasyon. Pagkatapos ang inokasyon ng materyal sa ibabaw ng frozen na nutrient agar upang makakuha ng mga nakahiwalay na kolonya. Ang pag-ayos ay maaaring isagawa alinsunod sa pamamaraang Drygalsky sa tatlong mga pinggan ng Petri na may medium na nakapagpalusog. Ang isang patak ng materyal ay inilapat sa unang tasa at kumalat sa isang spatula sa buong tasa. Pagkatapos, sa parehong spatula, ipamahagi ang natitirang kultura dito sa pangalawang tasa at sa parehong paraan sa pangatlo. Ang pinakamalaking bilang ng mga kolonya ay lalago sa unang plato, ang pinakamaliit sa pangatlo. Ang mga nakahiwalay na kolonya ay lalago sa isa sa mga plato, depende sa kung gaano karaming mga microbial cell ang nasa materyal na pagsubok.
Ang parehong resulta ay maaaring makamit sa pamamagitan ng sieving sa isang tasa. Upang magawa ito, hatiin ang tasa sa apat na sektor. Ang materyal na pinag-aaralan ay inoculated ng isang bacteriological loop na may mga stroke sa unang sektor, pagkatapos, pagkatapos ng pag-calisa at paglamig ng loop, ang inokulasyon ay ipinamamahagi mula sa unang sektor hanggang sa pangalawa at sa parehong paraan na sunud-sunod sa pangatlo at ikaapat na sektor. Ang mga nakahiwalay na kolonya ay nabuo mula sa mga indibidwal na microbial cells pagkatapos ng pang-araw-araw na pagpapapisa sa isang termostat.
Ika-2 araw - pag-aaral ng mga kolonya na lumaki sa mga plato, paglalarawan sa kanila. Ang mga kolonya ay maaaring maging transparent, translucent o opaque, mayroon silang magkakaibang sukat, bilugan na regular o hindi regular na mga balangkas, matambok o patag na hugis, makinis o magaspang na ibabaw, makinis o kulot, may gilid na mga gilid. Maaari silang walang kulay o puti, ginintuang, pula, dilaw. Batay sa pag-aaral ng mga katangiang ito, ang mga lumago na kolonya ay nahahati sa mga pangkat. Pagkatapos ang isang nakahiwalay na kolonya ay napili mula sa pangkat ng pag-aaral, isang pahid ang inihanda para sa pagsusuri ng mikroskopiko upang suriin ang homogeneity ng mga microbes sa kolonya. Ang parehong kolonya ay inoculated sa isang test tube na may isang slant nutrient agar.
Ika-3 araw - suriin ang kadalisayan ng kultura na lumago sa agar slant ng smear microscopy. Sa homogeneity ng mga pinag-aralan na bakterya, ang paghihiwalay ng isang purong kultura ay maaaring maituring na kumpleto.
Upang makilala ang nakahiwalay na bakterya, pinag-aaralan ang mga katangian ng kultura, iyon ay, ang likas na katangian ng paglaki sa likido at solidong nutrient media. Halimbawa, ang streptococci sa sabaw ng asukal ay bumubuo ng isang ilalim at parietal sediment, sa agar ng dugo - maliit, matukoy ang mga kolonya; Ang cholera vibrio ay bumubuo ng isang pelikula sa ibabaw ng alkaline peptone na tubig, at mga transparent na kolonya sa alkalina agar; ang salot bacillus sa nutritive agar ay bumubuo ng mga kolonya sa anyo ng "mga panyo sa puntas" na may isang siksik na gitna at manipis na kulot na mga gilid, at sa isang likidong nutrient na nutrient - isang pelikula sa ibabaw, at pagkatapos ay ang mga filament na umaabot mula dito sa anyo ng "stalactites ".
Paglinang at paghihiwalay ng mga purong kultura ng anaerobic bacteria
Para sa paglilinang ng mga anaerobes, kinakailangang ibaba ang potensyal na pagbabawas ng oksihenasyon ng daluyan, upang lumikha ng anaerobiosis sa pamamagitan ng pag-aalis ng oxygen sa pamamagitan ng pisikal, kemikal o biological na pamamaraan.
Kasama sa mga pisikal na pamamaraan ang:
1) mekanikal na pagtanggal ng hangin sa pamamagitan ng isang bomba mula sa anae-rostat, kung saan inilalagay ang mga pinggan na may mga inokasyon. Sa parehong oras, maaari mong palitan ang hangin ng isang walang malasakit na gas: nitrogen, hydrogen, carbon dioxide.
2) lumalaki sa isang daluyan na naglalaman ng pagbawas ng mga sangkap. Ang Kitta-Tarozzi Miyerkules ay isang sabaw ng asukal na may mga piraso ng atay o karne. Ang glucose at mga piraso ng organo ay may kakayahang magbawas. Ang daluyan ay ibinuhos sa itaas na may isang layer ng langis ng vaseline upang harangan ang pag-access ng oxygen sa hangin.
3) Ang pinakasimpleng, ngunit hindi gaanong maaasahang pamamaraan ay upang lumago nang malalim sa isang matangkad na haligi ng asukal agar.
Ang mga pamamaraan ng kemikal ay binubuo sa ang katunayan na ang mga pinggan na may mga pananim ng anaerobes ay inilalagay sa isang hermetically selyadong desiccator, kung saan inilalagay ang mga kemikal, halimbawa, pyrogallol at alkali, ang reaksyon sa pagitan ng paglipas ng pagsipsip ng oxygen.
Ang biological na pamamaraan ay batay sa sabay-sabay na paglilinang ng anaerobes at aerobes sa solid nutrient media sa mga pinggan ng Petri, na hermetically selyadong pagkatapos ng inokasyon. Sa una, ang oxygen ay hinihigop ng lumalaking mga aerobes, at pagkatapos ay nagsisimula ang paglago ng mga anaerobes.
Ang paghihiwalay ng isang purong kultura ng anaerobes ay nagsisimula sa akumulasyon ng anaerobic bacteria sa pamamagitan ng inokulasyon sa daluyan ng Kitta-Tarozzi. Sa hinaharap, ang mga nakahiwalay na kolonya ay nakuha sa isa sa dalawang paraan:
1) ang materyal ay inoculated sa pamamagitan ng paghahalo sa tinunaw na maligamgam na asukal agar sa mga tubo ng salamin. Matapos ang pagpapatayo ng agar, ang mga nakahiwalay na kolonya ay lumalaki sa kailaliman nito, na tinanggal sa pamamagitan ng paggupit ng tubo at nai-subculture sa medium na Kitt-Tarozzi (pamamaraan ni Weinberg);
2) ang inokasyon ng materyal ay isinasagawa sa mga plato na may medium na nakapagpalusog at napapaloob sa isang anaerostat. Ang mga nakahiwalay na kolonya na lumaki sa isang plato ay nai-subculture sa medium na Kitt-Tarozzi (pamamaraang Zeissler).
Paglinang ng iba pang mga mikroorganismo
Paglinang ng mycoplasmas
Ang Mycoplasmas ay pinag-aralan sa nutrient media na suplemento ng suwero at karbohidrat. Dahil ang mycoplasmas ay kulang sa isang cell wall, lumalaki lamang sila sa mga isotonic o hypertonic na kapaligiran. Sa solidong nutrient media, sa loob ng maraming araw, napakaliit na mga kolonya ang nabuo, na kahawig ng mga pritong itlog - na may isang convex center at isang flat translucent periphery. Ang Mycoplasmas ay maaari ding palaguin sa mga embryo ng manok o kultura ng cell.
Paglinang ng rickettsia at chlamydia
Ang Rickettsiae at chlamydiae ay obligado ng intracellular parasites. Para sa kanilang paglilinang, ginagamit ang mga cell culture, embryo ng manok at impeksyon ng hayop.
Paglilinang ng kabute
Para sa paglilinang ng mga kabute, ang siksik at likidong nutrient media ay ginagamit: madalas na daluyan ni Sabouraud, pati na rin ang media na naglalaman ng wort ng beer. Ang mga kabute ay lumalaki nang mas mabagal kaysa sa bakterya, bumubuo ang mga ito ng nakikitang paglago sa loob ng ilang araw. Ang temperatura ng paglilinang ay mas mababa kaysa sa bakterya - 22-30 ° C.
Paglinang ng mga spirochetes at protozoa
Kabilang sa mga spirochetes, pinakamadaling palaguin ang leptospira, kung saan ang tubig na may halong serbula ng dugo ng kuneho ay maaaring magsilbing medium ng nutrient.Ang Borrelia at treponema ay nalilinang sa ilalim ng mga kondisyon ng anaerobic sa mas kumplikadong nutrient media na naglalaman ng suwero, mga piraso ng tisyu ng hayop.
Kabilang sa mga protozoa, ang dysentery amoeba, lamblia, Trichomonas, leishmania, trypanosome, balantidia ay nalilinang sa nutrient media. Ang mga Toxoplasmas ay nalilinang sa mga embryo ng manok at mga kultura ng tisyu. Ang mga pamamaraan sa paglilinang para sa malaria plasmodia ay nasa ilalim ng pag-unlad.
Mga pamamaraan para sa pag-aaral ng aktibidad na enzymatic (mga katangian ng biochemical)
Sa kasanayan sa microbiological, ang pag-aaral ng aktibidad na enzymatic ay ginagamit upang makilala ang mga mikroorganismo, dahil ang bawat species ng microbial ay may isang tiyak na hanay ng mga enzyme.
Upang matukoy ang aktibidad ng proteolytic, ang mga microbes ay inoculated na may isang iniksyon sa isang haligi ng gelatin, at pagkatapos ng 3-5 araw ng pagpapapisa sa temperatura ng kuwarto, ang character ng gelatin liquefaction ay nabanggit: sa anyo ng isang funnel, isang kuko, isang stocking o sa anyo ng isang nakabaligtad na punungkahoy ng Pasko. Ang aktibidad ng protolytictic ay natutukoy din sa pamamagitan ng pagbuo ng mga produkto ng agnas ng protina: indole, hydrogen sulfide, ammonia. Upang matukoy ang mga ito, ang mga mikroorganismo ay inoculated sa sabaw ng meat-peptone, at ang mga papel na tagapagpahiwatig ay inilalagay sa pagitan ng leeg ng test tube at isang cotton stopper, hindi kasama ang kanilang pakikipag-ugnay sa daluyan. Kapag nabuo ang indole, ang papel na pinapagbinhi ng isang puspos na solusyon ng oxalic acid ay nagiging rosas; sa pagkakaroon ng hydrogen sulfide, ang papel na pinapagbinhi ng lead acetate ay nagiging itim; kapag nabuo ang amonya, ang pulang papel na litmus ay nagiging asul.
Upang matukoy ang mga katangiang saccharolytic ng mga microbes, ginagamit ang kaugalian na diagnostic media, tulad ng Giss media, medium ni Olkenitsky, medium ni Endo, medium ni Levin, medium ng Ploskirev.
Ang Media Endo, Levin, Ploskirev sa mga pinggan ng Petri ay ginagamit upang makilala ang mga bakterya ng bituka na pangkat sa pamamagitan ng kanilang kakayahang mag-ferment ng lactose. Naglalaman ang media na ito ng nutrient agar, lactose at isang tagapagpahiwatig na nagbabago ng kulay sa isang acidic medium - isang tagapagpahiwatig ng pH. Kung maghasik ka ng bakterya na nagpapalaki ng lactose, tulad ng E. coli, sa gayong kapaligiran, nabubuo ang acid bilang resulta ng pagbuburo ng lactose, at ang tagapagpahiwatig ay magbabago ng kulay sa isang acidic na kapaligiran. Samakatuwid, ang mga kolonya ng Escherichia coli sa naturang media ay may kulay ayon sa kulay ng tagapagpahiwatig: sa daluyan nina Endo at Ploskirev - na pula, sa daluyan ni Levin - sa itim at asul. Ang mga kolonya ng bakterya na hindi nagbubuklod ng lactose, tulad ng salmonella at mga stick ng disenteriya, ay walang kulay.
Ang Giss media (medium "variegated") ay inihanda batay sa tubig ng peptone o semi-likidong karne-peptone agar. Naglalaman ng anumang isang karbohidrat o polyhydric na alak at isang tagapagpahiwatig. Kapag lumaki ang isang microbe sa daluyan ni Giss, na pinapaloob ang substrate na ito sa pagbuo ng acid at gas, ang medium ay magbabago ng kulay, sa isang medium na likidong likido, ang mga bula at rupture ay lilitaw sa kapal ng agar, sa isang likidong likido - isang gas bubble sa isang baso na float. Kapag ang substrate ay fermented lamang sa acid, isang pagbabago lamang sa kulay ng daluyan ang nangyayari.
Ang pinagsamang media na naglalaman ng hindi isang karbohidrat, ngunit dalawa o tatlo din ang ginagamit, halimbawa, medium ni Olkenitsky. Ang isang tubo ng daluyan na ito ay pinapalitan ang agar slant at Giss media ng lactose, glucose at sukrosa. Pagkatapos ng isterilisasyon sa tinunaw na estado, ang daluyan ng test tube ay na-beveled upang ang isang haligi at isang beveled na bahagi ay nakuha. Ang paghahasik ay ginagawa ng isang stroke kasama ang beveled na bahagi at isang tusok sa isang haligi. Kapag ang lactose o sucrose ay fermented, ang kulay ng buong daluyan ay nagbabago; kapag ang isang glucose ay fermented, ang kulay lamang ng haligi ang nagbabago. Ang pagbuo ng gas ay ipinahiwatig ng pagkakaroon ng mga bula sa agar haligi. Kapag naglabas ang microbes ng ammonia, ang kulay ng daluyan ay hindi nagbabago. Ang pagbuo ng hydrogen sulfide ay ipinakita sa pamamagitan ng pag-blackening sa agar table
Para sa isang malinaw na pamamaraan para sa pagtukoy ng aktibidad na enzymatic ng bakterya, ginagamit ang mga microtest system at isang sistema ng tagapagpahiwatig ng papel (NIB)
Ang microtest system ay isang lalagyan na gawa sa transparent polystyrene, na binubuo ng maraming mga cell. Ang mga cell ay naglalaman ng pinatuyong nutrient media na may mga karbohidrat at tagapagpahiwatig ng pH. Ang isang suspensyon ng isang kultura ng bakterya ng isang tiyak na density ay na-inoculate sa bawat cell. Ang isang solusyon ng asin ay ibinuhos sa control cells.mga kulay
tagapagpahiwatig
Ang mga sistema ng tagapagpahiwatig ng papel (NIB) para sa pagkilala sa pamilyang Enterobacteriaceae ay mga disk o piraso ng chromatographic paper, natatakpan ng isang proteksiyon na pelikula at naglalaman ng isang tukoy na substrate at isang tagapagpahiwatig. Sa pamamagitan ng pagbabago ng kulay ng tagapagpahiwatig Upang matukoy ang hydrogen sulfide, inilalagay ang disk sa ibabaw ng MPA, binuran ng isang iniksyon, na nagbibigay-daan sa iyo upang sabay na matukoy ang kadaliang kumilos
Sa lahat ng mga tubo, ang paunang resulta sa parehong araw at ang pangwakas na resulta sa susunod na araw ay isinasaalang-alang.
Ang aktibidad ng oxidase ay natutukoy sa pamamagitan ng paghuhugas ng kultura sa isang tagapagpahiwatig na papel. Ang resulta ay isinasaalang-alang pagkatapos ng isang minuto.
INSULAT na TISSUE AT PLANT CELLS
Paglinang ng mga nakahiwalay na mga cell at tisyu sa artipisyal na nutrient media sa ilalim ng mga sterile na kondisyon (in vitro) natanggap ang pangalan ng pamamaraan ng kultura ng mga nakahiwalay na tisyu.
Dahil sa ang katunayan na ang mga halaman ng binhi ay may pinakamahalagang kahalagahan sa buhay ng tao, ang mga pamamaraan at kundisyon para sa kanilang paglilinang ay nabuo nang mas mahusay kaysa sa mga gymnosperms o algae, na ang paglilinang na kung saan ay sa mga sterile na kondisyon ay nagdudulot ng ilang mga paghihirap. Gayunpaman, anuman ang pag-aari ng mga halaman sa isang partikular na pangkat na taxonomic, may mga pangkalahatang kinakailangan para sa paglilinang ng mga bagay sa kultura. sa vitro
Asepis. Una sa lahat, ang paglilinang ng mga fragment ng tisyu o organ ng halaman - mga explant, at kahit na higit pa sa mga indibidwal na selula, ay nangangailangan ng kumpletong asepis. Ang mga mikroorganismo na maaaring makapasok sa medium na nakapagpapalusog ay nagpapalabas ng mga toxin na pumipigil sa paglago ng cell at humantong sa pagkamatay ng kultura. Samakatuwid, para sa lahat ng mga manipulasyon sa mga cell at tisyu sa panahon ng paglilinangsa vitro obserbahan ang ilang mga patakaran ng asepsis sa isang kahon ng laminar o sa mga aseptikong silid. Sa unang kaso, ang asepis ay nakakamit sa pamamagitan ng pagbibigay ng sinala na isterilisadong hangin na nakadirekta mula sa kahon ng laminar sa labas sa manggagawa. Ang mga silid na aseptiko ay isterilisado gamit ang mga ultraviolet lamp, at gumagana ang mga ito sa mga nasabing silid na wala nang damit. Ang pagtatrabaho sa ibabaw ng mga mesa sa mga aseptikong silid at tool ay karagdagan na isterilisado sa alkohol bago magtrabaho.
Ang mga malinis na pinggan na dati nang nakabalot sa papel o foil, mga tool, papel, cotton wool ay isterilisado ng tuyong init sa isang oven sa 160 ° C sa loob ng 1.5-2 na oras. Ang kultura ng kultura ay isterilisado sa isang autoclave na 120 ° C at mataas na presyon sa loob ng 15 - 20 minuto. Kung ang media ng kultura ay naglalaman ng mga sangkap na nabubulok sa panahon ng autoclaving, dapat silang isterilisado ng pagsala sa pamamagitan ng isang filter ng bakterya. Pagkatapos ang mga sterile filter na sangkap ay idinagdag sa isang pre-autoclaved medium na pinalamig sa temperatura na 40 ° C.
Ang mga tisyu ng halaman mismo ay maaaring magsilbing isang seryosong mapagkukunan ng impeksyon, dahil ang epiphytic microflora ay palaging nasa kanilang ibabaw. Samakatuwid, kinakailangan ang ibabaw ng isterilisasyon, na isinasagawa bilang mga sumusunod. Dati, ang bahagi ng halaman kung saan makukuha ang explant ay hugasan ng sabon at tubig at banlaw ng malinis na tubig. Pagkatapos ang materyal ng halaman ay isterilisado sa mga solusyon ng mga disimpektante. Ang ilan sa mga sangkap na ito, pati na rin ang oras ng isterilisasyon ay ipinakita sa talahanayan. 6.1.
|
Talahanayan 6.1 Ang isterilisasyon ng orihinal na materyal na halaman (ayon kay R.G.Butenko, 1999) Isang bagay |
Oras ng isterilisasyon, min |
||
|
diacid 0.1% |
mercuric chloride 0.1% |
hydrogen peroxide, 10-12% |
|
|
Ang mga binhi ay tuyo |
15-20 |
10-15 |
12-15 |
|
Namamaga ang mga binhi |
6-10 |
6-8 |
6-8 |
|
Tisyu ng tangkay |
20-40 |
20-25 |
— |
|
Dahon |
1-3 |
0,5-3 |
‘ 3-5 |
|
Apexes |
1-10 |
0,5-7 |
2-7 |
Matapos mapanatili ang mga explants sa isang disimpektadong solusyon, hugasan sila ng maraming beses sa dalisay na tubig at ang panlabas na layer ng mga cell sa mga hiwa ng mga explants ay tinanggal sa isang scalpel, dahil maaari itong mapinsala habang isterilisasyon.
Ang mga mikroorganismo ay maaari ding matagpuan sa loob ng tisyu ng halaman. Ang panloob na impeksyon ay pinaka-karaniwan sa mga tropikal at subtropiko na halaman. Samakatuwid, bilang karagdagan sa ibabaw ng isterilisasyon, kung minsan kinakailangan na gumamit ng mga antibiotics, na pumapatay sa microbial flora sa loob ng tisyu. Gayunpaman, dapat pansinin na ang naturang paggamot ay hindi laging humantong sa isterilisasyon ng mga panloob na tisyu, dahil mahirap pumili ng isang naka-target na antibiotic.
Culture Media. Ang mga nakahiwalay na mga cell at tisyu ay na-kultura sa multicomponent nutrient media. Maaari silang magkakaiba-iba sa kanilang komposisyon, subalit, ang komposisyon ng lahat ng media ay kinakailangang may kasamang mga macro- at microelement na kinakailangan para sa mga halaman, karbohidrat, bitamina, phytohormones at kanilang mga synthetic analogue. Ang mga karbohidrat (karaniwang sucrose o glucose) ay kasama sa anumang pormula sa nutrisyon sa isang konsentrasyon na 2-3%. Ang mga ito ay kinakailangan bilang isang sangkap sa nutrisyon, dahil ang karamihan sa mga tisyu ng kaluskos ay walang kloropila at hindi kayang magkaroon ng nutrisyon ng autotrophic. Samakatuwid, lumaki ang mga ito sa nagkakalat na mga kondisyon ng ilaw o sa madilim. Ang pagbubukod ay ang callus tissue ng mandrake, amaranth at ilang iba pang mga halaman.
Ang kailangang-kailangan na mga bahagi ng media ng kultura ay dapat na ^ auxins, na sanhi ng pagduduwal ng mga sumasabog na cell, at mga cytokinin, na nagdudulot ng paghahati ng cell. Kapag nagbago ang ratio sa pagitan ng mga phytohormones na ito o kapag idinagdag ang iba pang mga phytohormones, maaaring magdulot ng iba't ibang uri ng morphogenesis.
Ang mataas na nilalaman ng nitrates, ammonium ions, potassium, phosphate ay nagtataguyod ng mabilis na paglago ng cell. Ang pag-ubos ng kapaligiran ay makabuluhang binabawasan ang paglago at mga proseso ng pangalawang metabolismo. Gayunpaman, ang paunang mababang nilalaman ng mga phosphates sa medium na nakapagpalusog ay maaaring pasiglahin ang pagbubuo ng pangalawang metabolites. Napag-alaman na ang paglilinang ng licorice calli sa isang daluyan na may kalahati ng konsentrasyon ng nitrogen at posporus sa madilim ay nagdaragdag ng nilalaman ng mga phenolic compound na 1.6 beses kumpara sa tumatawag na calli sa isang kumpletong daluyan. Ang endosperm ng mga wala pa sa gulang na mga embryo (niyog, chestnut ng kabayo, atbp.), Ang katas ng ilang mga puno, iba't ibang mga katas (malt, yeast, tomato juice) ay maaaring idagdag sa daluyan. Ipinakikilala ang mga ito sa kapaligiran. ang nagbibigay ng mga kagiliw-giliw na resulta, ngunit ang mga nasabing eksperimento ay mahirap na kopyahin, dahil ang aktibong sangkap ay karaniwang hindi alam eksakto. Halimbawa, ang pagdaragdag ng magkakahiwalay na mga praksyon ng coconut milk sa medium na nakapagpalusog ay hindi nagbigay ng anumang mga resulta, habang ang hindi nabuong endosperm ay sanhi ng paghati sa cell.
Kapag naghahanda ng solidong nutrient media para sa paglilinang sa ibabaw ng mga kaluskos ng kalyo, ginagamit ang purified agar-agar, isang polysaccharide na nakuha mula sa damong-dagat, ay ginagamit. Tulad ng mga halimbawa sa talahanayan. 6.2 ay nagpapakita ng mga komposisyon ng pinakakaraniwang media ng kultura.
Ang kapaligiran ng Murashige at Skoog ay ang pinaka maraming nalalaman. Ito ay angkop para sa pagbuo ng calli, ang pagpapanatili ng hindi organisadong paglago ng kalus, at ang induction ng morphogenesis sa karamihan ng mga halaman na may dicotyledonous. Kaya, ang isang pagbabago sa ratio ng auxin at kinetin ay humahantong sa pagbuo ng alinman sa mga ugat (pamamayani ng auxin), o; mga pananim na stem (pamamayani ng kinetin).
Ang medium na Gamborg at Eveleg ay angkop para sa paglilinang ng mga cell at tisyu ng mga legume at cereal, ang medium ng White ay nagbibigay ng * pag-uugat ng mga shoots at normal na paglaki ng tangkay pagkatapos ng pagbabagong-buhay, at ang medium na Nitsch at Nitsch ay angkop para sa induction ng andro-akogenesis sa kultura ng anther.
Mga kadahilanan na pisikal. Para sa paglaki at pag-unlad ng mga tisyu ng halaman; sa vitro pisikal na kadahilanan - ilaw, magkaroon ng isang mahusay na impluwensya; temperatura, pagpapahangin, kahalumigmigan. |
Ilaw. Karamihan sa mga tisyu ng kaluskos ay maaaring lumago sa mababang ilaw o madilim na mga kondisyon, dahil hindi sila may kakayahang makunan ng litrato *; synthesize.Sa parehong oras, ang ilaw ay maaaring kumilos bilang isang kadahilanan na nagbibigay ng morphogenesis at pag-activate ng mga proseso sa pangalawang pagkakataon.
|
!Komposisyon ng nutrient media na ginamit sa paglilinang ng mga cell at tisyu (pagkatapos ng R.G Butenko, 1999) |
Konsentrasyon ng nutrient media, mg / l |
|||
|
Bahagi ng media |
Murashige at |
Gamborg at |
Puti, |
Nich at Nich, |
|
Skoog, 1962 |
Evelega, 1968 |
1939 |
1974-1975 |
|
|
KN03 |
1900 |
3000 |
81 |
950 |
|
NH4NO3 |
1650 |
— |
— |
720 |
|
Ca (N03)2 |
— |
— |
142 |
— |
|
Ca (N03)2-4H20 |
— |
— |
— |
— |
|
(NH4)2S04 |
— |
134 |
— |
— |
|
MgS04-7H20 |
370 |
500 |
74 |
185 |
|
CaCl2H20 |
— |
— |
166 |
|
|
CaClr2H20 |
440 |
150 |
— |
— |
|
KC1 |
— |
65 |
— |
|
|
KH2P04 |
170 |
— |
12 |
68 |
|
NaH2P04H20 |
— |
150 |
— |
— |
|
MnS04H20 |
— |
10 |
— |
— |
|
MnS0 „-4H20 |
22,3 |
— |
— |
25 |
|
ZnS04-4H20 |
8,6 |
— |
— |
— |
|
ZnS04-7H20 |
— |
2 |
— |
10 |
|
H3B04 |
6,2 |
3 |
— |
10 |
|
CuS04-5H20 |
0,025 |
0,075 |
— |
0,025 |
|
Na2Mo04-2H20 |
0,25 |
0,25 |
— |
0,25 |
|
CoCl2-6H20 |
0,025 |
— |
— |
— |
|
FeS04-7H20 |
27,8 |
— |
— |
27,8 |
|
Na EDTA-2H20 |
37,3 |
— |
— |
37,3 |
|
Sequestrene 330-Fe |
28 |
— |
— |
|
|
Mesoinositis |
100 |
— |
— |
200 |
|
Bitamina C |
— |
— |
— |
3 |
|
Thiamine-HCl |
0,5 |
— |
— |
3 |
|
Pyridoxine-HCl |
0,5 |
— |
— |
1 |
|
Isang nikotinic acid |
0,5 |
— |
— |
— |
|
Sucrose |
30 000 |
20000 |
2000 |
60 000 |
|
Agar "Difco", gel |
— |
— |
— |
7000 |
|
rith, agarose |
||||
ika synthes. Ang mga fluorescent lamp ay ginagamit bilang isang mapagkukunan ng ilaw. Para sa karamihan ng mga halaman na mala-halaman, ang pinakamabuting kalagayan na pag-iilaw ay sa paligid ng 1000 lux. Masyadong mababa (300 lux) o mataas (3000-10,000 lux) na ilaw ay pumipigil sa paglaki. Ang ilaw ay maaaring makaapekto sa metabolismo ng mga callus cell. Kaya, sa mga kultura ng halaman ng tsaa, ang biosynthesis ng polyphenols ay tumaas sa ilalim ng impluwensya ng ilaw. Sa kabaligtaran, sa kultura ng cell Scopolia parvi- flora pinigilan ng ilaw ang pagbuo ng mga alkaloid. Bilang karagdagan sa tindi ng pag-iilaw, ang kalidad ng ilaw ay nakakaapekto sa kultura ng tisyu at mga katangian ng physiological na ito. Samakatuwid, higit sa 20 mga flavone at flavonol glycosides ay nabuo sa mga kultura ng perehil cell pagkatapos ng pag-iilaw nito na may tuluy-tuloy na ilaw na "malamig na puti". Kasabay nito, ang pagbubuo ng flavone glycosides ay pinapagana ng sunud-sunod na pag-iilaw ng ultraviolet light, at pagkatapos ay ilaw na nakahiga sa rehiyon ng "pulang-mahabang-alon na pula"
Temperatura. Para sa karamihan sa mga kultura ng kaluskos, ang pinakamainam na temperatura ay 26 ° C. Sa parehong oras, ang mga kultura ng calli at cell ng diosorea deltoid ay tumutubo nang maayos kahit sa temperatura na 32 ° C. V Hindi tulad ng paglaki ng mga kultura ng cell at tisyu, ang induction ng kanilang morphogenesis ay nangangailangan ng mas mababang temperatura (18 - 20 ° C). Epekto ng temperatura sa metabolismo ng cell sa vitro hindi magandang pinag-aralan. Mayroong katibayan na sa mga kultura ng kaluskos ang pinakamataas na pagbuo ng mga alkaloid ay naobserbahan sa temperatura na 25 ° C, at sa pagtaas ng temperatura, mahigpit itong bumaba. Sa mga kultura ng suspensyon ng cell Ipomoea ang nilalaman ng mga fatty acid ay tumaas nang malaki kung sila ay lumaki sa suboptimal na paglaki ng temperatura (15 ° C) Samakatuwid, kapag lumalaki ang isang kultura sa vitro kinakailangan upang maingat na pag-aralan ang impluwensya ng lahat ng mga abiotic factor, kabilang ang temperatura, sa paglaki at metabolismo ng mga cell.
Aerasyon. Para sa paglilinang ng mga pananim na suspensyon, ang pagpapahangin ay may malaking kahalagahan. Lalo na mahalaga na ibigay ang mga may kulturang cell na may hangin sa malalaking dami ng fermenters.
Kapag inihambing ang iba't ibang mga uri ng fermenter, ipinakita na ang pagbubuo ng pangalawang metabolite sa kulturang suspensyon ay pinakamalaki kapag ang hangin ay ibinibigay mula sa ibaba. Kapag ang mga cell ay lumago sa maliit na dami (sa mga flasks), nakamit ang normal na aeration na may patuloy na pagpapakilos ng suspensyon.
Humidity. Ang pinakamainam na kahalumigmigan sa silid kung saan ako lumalaki! Ang mga pananim ay dapat na 60 - 70%.
Kaya, ang paglilinang ng mga cell at tisyu ay nakasalalay sa maraming mga kadahilanan ng panlabas na kapaligiran, at ang kanilang aksyon ay hindi palaging mabuti? stno Samakatuwid, kapag nagpapakilala ng isang bagong species ng halaman sa kultura, kinakailangan itoT Una sa lahat, kinakailangan upang maingat na pag-aralan ang impluwensya ng mga pisikal na kadahilanan sa paglago at mga katangian ng pisyolohikal ng kulturang ito.
Ang paglilinang ng mga nakahiwalay na mga cell at tisyu sa artipisyal na nutrient media sa ilalim ng mga sterile na kondisyon (in vitro) ay tinatawag na pamamaraan ng kultura ng mga nakahiwalay na tisyu.
Dahil sa ang katunayan na ang mga halaman ng binhi ay may pinakamahalagang kahalagahan sa buhay ng tao, ang mga pamamaraan at kundisyon para sa kanilang paglilinang ay mas mahusay na binuo kaysa sa mga gymnosperms o algae, na ang paglilinang na sa ilalim ng mga sterile na kondisyon ay nagdudulot ng ilang mga paghihirap. Gayunpaman, anuman ang pag-aari ng mga halaman sa isang partikular na pangkat na taxonomic, may mga pangkalahatang kinakailangan para sa lumalagong mga bagay sa kultura na in vitro.
Asepis. Una sa lahat, ang paglilinang ng mga fragment ng tisyu o organ ng halaman - explants, at kahit na higit pa para sa mga indibidwal na cell, nangangailangan ng kumpletong asepsis.Ang mga mikroorganismo na maaaring makapasok sa medium na nakapagpapalusog ay nagpapalabas ng mga toxin na pumipigil sa paglago ng cell at humantong sa kamatayan ng kultura, samakatuwid, sa lahat ng mga manipulasyon sa mga cell at tisyu sa panahon ng paglilinang ng vitro, sinusunod ang ilang mga alituntunin ng aseptiko.
Culture Media. Ang mga nakahiwalay na mga cell at tisyu ay na-kultura sa multicomponent nutrient media. Maaari silang magkakaiba-iba sa kanilang komposisyon, subalit, ang komposisyon ng lahat ng media ay kinakailangang may kasamang mga macro- at microelement na kinakailangan para sa mga halaman, karbohidrat, bitamina, phytohormones at kanilang mga synthetic analogue. Ang mga karbohidrat (karaniwang sucrose o glucose) ay kasama sa anumang pinaghalong pagkaing nakapagpalusog sa isang konsentrasyon na 2-3%. Ang mga ito ay kinakailangan bilang isang sangkap sa nutrisyon, dahil ang karamihan sa mga tisyu ng kaluskos ay walang kloropila at hindi kayang magkaroon ng nutrisyon ng autotrophic. Samakatuwid, lumaki ang mga ito sa nagkakalat na mga kondisyon ng ilaw o sa dilim. Ang sapilitan na mga sangkap ng kultura ng media ay dapat na mga auxins na sanhi paghiwalay mga explant cell, at cytokinins na nagdudulot ng paghahati ng cell. Kapag nagbago ang ratio sa pagitan ng mga phytohormones na ito o kapag idinagdag ang iba pang mga phytohormones, iba't ibang mga uri ng morphogenesis.
Mga kadahilanan na pisikal. Ang paglago at pag-unlad ng mga tisyu ng halaman sa vitro ay lubos na naiimpluwensyahan ng mga pisikal na kadahilanan - ilaw, temperatura, aeration, halumigmig. Karamihan sa mga tisyu ng kaluskos ay maaaring lumago sa mababang ilaw o madilim na mga kondisyon dahil hindi nila nagawang i-photosynthesize. Sa parehong oras, ang ilaw ay maaaring kumilos bilang isang kadahilanan na nagbibigay ng morphogenesis at buhayin ang mga proseso ng pangalawang pagbubuo. Para sa karamihan sa mga kultura ng kaluskos, ang pinakamainam na temperatura ay 26 ° C. Para sa paglilinang ng mga pananim na suspensyon, ang pagpapahangin ay may malaking kahalagahan. Lalo na mahalaga na ibigay ang mga may kulturang cell na may hangin sa malalaking dami ng fermenters. Ang pinakamainam na kahalumigmigan sa silid kung saan lumalaki ang mga pananim ay dapat na 60-70%. Kaya, ang paglilinang ng mga cell at tisyu ay nakasalalay sa maraming mga kadahilanan sa kapaligiran, at ang kanilang epekto ay hindi palaging kilalang kilala. Samakatuwid, kapag nagpapakilala ng isang bagong species ng halaman sa isang kultura, kinakailangan muna sa lahat na maingat na pag-aralan ang impluwensya ng mga pisikal na kadahilanan sa paglago at mga pisyolohikal na katangian ng kulturang ito.
Idinagdag ang Petsa: 2016-06-02; mga pagtingin: 493;
TINGNAN PA:
Lumalagong proseso mga cell at tela sa artipisyal na nutrient media sa ilalim ng mga sterile na kondisyon (in vitro) ay tinatawag na isang paraan ng pagkuha ng isang kultura ng mga nakahiwalay na tisyu. Karaniwan ang kultura ng nakahiwalay na tisyu kalyo at mas madalas tisyu ng tumor (fig. 3.1. at 3.2).
Mga kultura ng nakahiwalay na mga cell at tisyu.
Paggamit ng isang kultura ng mga nakahiwalay na mga cell at tisyu.
Ang mga kulturang nakahiwalay na tisyu ay malawakang ginagamit sa agrikultura at produksyong pang-industriya. Taglay nila kalamangan kumpara sa tradisyonal na mga materyales sa halaman (mga ligaw at taniman na mga halaman), katulad ng:
1. Kalayaan mula sa panlabas na kundisyon.
2. Pag-optimize ng lumalagong mga kondisyon.
3. Pag-aautomat at computerisasyon ng mga proseso.
4. Ang kakayahang mapalago ang mga endangered species ng halaman.
5. Posibilidad ng mass clonal micropropagation ng prutas at gulay at pandekorasyon na halaman.
6. Pagbawi mula sa viral at iba pang mga impeksyon.
7. Pagkakataon sa pamamagitan ng kultura sa vitro, pagpapalawak ng mga lugar ng trabaho sa pag-aanak, iyon ay, upang makakuha mga clone mga cell, pagkatapos ay mga halaman na may mga naka-program na katangian.
Dahil sa kakayahan ng mga cell na makapag-synthesize sa kultura pangalawang metabolite, isang bagong sangay ng industriya ang lumitaw, isinasagawa ang biological synthesis ng mga sangkap na kinakailangan para sa tao.
Mga kondisyon para sa paglilinang ng mga tisyu at selula.
Paglinang ng mga fragment ng tisyu o isang halaman - explants, at kahit na higit pa para sa mga indibidwal na cell, nangangailangan ng kumpletong asepsis.
Ang mga mikroorganismo na maaaring makapasok sa kulturang medium na lihim mga lasonpinipigilan ang paglaki ng mga cell at humahantong sa pagkamatay ng kultura. Samakatuwid, ang lahat ng mga manipulasyon sa mga cell at tisyu sa panahon ng paglilinang sa vitro natupad bilang pagsunod sa ilang mga patakaran ng asepsis sa kahon ng laminar o sa mga aseptikong silid. Ang asepsis ay nakakamit sa pamamagitan ng pagbibigay ng sterile air na dumaan sa mga filter, na nakadirekta mula sa kahon ng laminar hanggang sa labas. Sa ibabaw ng mga tisyu ng halaman palaging may epiphytic microflora. Samakatuwid, kinakailangan ang ibabaw ng isterilisasyon, na nakamit sa pamamagitan ng paggamot ng mga lugar ng mga halaman kung saan saan explants, mga disimpektante (hydrogen peroxide, mercuric chloride).
Upang gumana sa biological material, kinakailangan ang mga sumusunod na sangkap:
- malinis na pinggan at isang bioreactor (fermenter);
- daluyan ng nutrient medium;
- pinakamainam na ilaw;
- pinakamainam na temperatura;
- pinakamainam na kahalumigmigan;
- aeration.
Malinis na pinggan at fermenter. Ang mga instrumento at cotton wool na dating nakabalot sa papel o foil ay isterilisado ng tuyong init sa pagpapatayo ng gabinete sa temperatura na 160 ° C sa loob ng 1.5-2 na oras.
Kapag gumagamit ng iba't ibang mga uri ng fermenter, nalaman na ang mga katangian ng pisyolohikal ng mga kultura ay maaaring magbago; samakatuwid, ang pagbubuo ng pangalawang mga metabolite sa isang kultura ng suspensyon ay dapat na isagawa na may suplay ng hangin mula sa ibaba. Sa ilalim ng mga kundisyong ito, ang synthesis ay nagpapatuloy na mas aktibo (Larawan 3.3).
Kapag ang lumalaking mga cell sa maliit na dami, halimbawa, sa mga flasks, nakamit ang normal na aeration na may patuloy na pagpapakilos ng suspensyon.
Culture Media... Ang paglilinang ng mga nakahiwalay na mga cell at tisyu ay nagaganap sa multicomponent nutrient media... Maaari silang magkakaiba-iba sa kanilang komposisyon, gayunpaman, ang komposisyon ng lahat ng media ay kinakailangang may kasamang isang sangkap ang pundasyon, kung saan idinagdag ang mga pangkat ng mga sangkap na kinakailangan para sa mga halaman: mga macro- at microelement, carbohydrates, bitamina at phytohormones. Ang nasabing bahagi ng bahagi ay agar-agar - isang polysaccharide ng damong-dagat, na may kakayahang bumuo ng mga gel sa tubig na tumitibay sa 45 ° C. Maaaring idagdag sa medium ng kultura endosperm immature embryos (coconut, horse chestnut), syrup ilang mga puno, magkakaiba mga katas (malt, yeast), tomato juice. Ang kanilang pagpapakilala sa kapaligiran ay nagbibigay ng isang positibong resulta. Gayunpaman, ang bawat aktibong sangkap ay may mga teknolohikal na katangian na likas lamang dito.
Bigas 3.3. Bioreactor (fermenter) para sa lumalagong mga mikroorganismo, selula o tisyu
Ang pagdidibahagi ay ang batayan ng proseso ng pagbuo ng kalus.
Ang pagdidiskitibo ay ang pagbabalik ng mga dalubhasang mga cell sa meristematic na estado kapag nakakuha sila ng kakayahang maghati.
Ang mga organo at tisyu ng mga halaman ay nagsisilbing panimulang materyal para sa pagkuha ng mga kultura ng mga cell at tisyu, subalit, ang mga dahon ng halaman ay mas madalas na ginagamit para dito.
Ang dating nagtrabaho na sterile fragment ng dahon ay inilalagay sa isang solidong medium na nakapagpalusog. Ang mga dahon ay binubuo ng iba't ibang mga tisyu, na ang mga cell ay pinag-iiba at binubuo ng iba't ibang mga molekula ng mga protina, karbohidrat, lipid, at iba pang mga sangkap na katangian ng mga cell na ito. Ang mga magkakaibang cell na ito ay walang kakayahang hatiin.
Sa proseso ng mekanikal na pinsala sa sheet ang explant ay pinakawalan, at sa ilalim ng impluwensya ng mga halaman ng halaman na idinagdag sa kapaligiran, mga auxins at cytokinins ang cell ay nabawasan. Nawalan ito ng mga sangkap ng pag-iimbak - almirol, protina, lipid, dalubhasang mga organel, kloroplas, atbp Bilang resulta, ang lahat ng mga cell ay nakakakuha ng mga bagong malapit na katangian ng morphological at physiological, ibig sabihin maging mga cell ng callus (paghahati). Ang kaluskos ng tisyu ay nabuo sa leaf explant.
Mga uri ng mga kultura ng cell. Nakasalalay sa pamamaraan at kundisyon ng paglilinang, maraming uri ng mga kultura ng cell at tisyu:
- kultura ng kalyo;
- kultura ng suspensyon;
- kultura ng solong cell.
Kung paglilinang nangyayari mababaw sa medium ng nutrient ng agar, pagkatapos ay nabuo ang tisyu ng kalus. Wala itong malinaw na istraktura, ngunit maaari itong mag-iba sa density. Ang pinagmulan at lumalaking mga kundisyon ay tumutukoy kung ang kalyo tisyu ay maluwag, katamtamang density, o siksik.
Pangkalahatang katangian ng mga callus cell. Ang cell ng kalus ay may bilang ng mga pag-aari na pareho sa lahat mga cell ng halaman... Ito ang ongeny ng mga cell, paglaban sa ilang mga hindi kanais-nais na mga kadahilanan sa kapaligiran at iba pang mga katangian. Sa parehong oras, sa panahon ng kanilang paglilinang, ang mga callus cells ay nakakakuha ng kanilang sariling mga katangian, tulad ng physiological asynchrony, heterogeneity ng genetiko, at ilang iba pa.
Physiological asynchrony nakasalalay sa katotohanan na sa bawat sandali ng oras ang mga cell ay nasa iba't ibang mga yugto ng paglago: ang ilan ay naghahati, ang iba ay lumalaki, at ang iba pa ay tumatanda na. Samakatuwid, ang pangkalahatang pisyolohikal na pag-iipon ng buong populasyon ng mga callus cells ay karaniwang tinatasa ng estado ng karamihan sa mga cell (Larawan 3.4).
Bigas 3.4. Ang mga callus cells ay nasaBigas 3.5. Lumabas ang Protoplast
Idinagdag ang Petsa: 2016-05-28; mga pagtingin: 1915;
Katulad na mga artikulo:
